一、PCR實驗室平面布局
1、PCR實驗室可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組PCR實驗,通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及產(chǎn)物分析四個實驗過程,若實驗工藝需要,還應(yīng)增加樣品粉碎過程。
1.1、分散形式PCR實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠,呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR實驗室,由于各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
1.2、組合形式PCR實驗室, 是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室,由于各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間,以減少室內(nèi)外空氣交換。
2、各區(qū)的功能分別為:試劑準備區(qū)(擴增試劑的配制、分裝和保存)、樣品處理區(qū)(樣品登記、分裝;核酸提取、保存和加樣)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)(擴增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報告)。
3、擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴格分開,須使用不同的房間,兩區(qū)之間最好有一定的間隔。進入各工作區(qū)域必須嚴格按照單一方向進行,不同的工作區(qū)域使用不同的工作服,例如不同的顏色。工作人員離開各工作區(qū)域時,不得將工作服帶出。使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進行少量試劑配制。
4、在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi):在生物安全柜內(nèi)操作。每個實驗人員、實驗組分別使用各自的試劑及耗材。盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實驗前后進行清潔及消毒。
二、?PCR實驗室建設(shè)規(guī)劃及設(shè)計要點
1、主體結(jié)構(gòu)
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2、標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū),?同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
可打開緩沖區(qū)Ⅰ,緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣,在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口,空氣通過回風口向室內(nèi)換氣。
3、消毒
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū)?還設(shè)置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。
6、照明
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
7、實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制
為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
三、PCR實驗室嚴格管理
1.嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門。
2.盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
3.擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等。
4.擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應(yīng)特別注意實驗人員的安全防護。
5.完備的實驗室配套設(shè)施,完備的實驗室配套設(shè)施是保證實驗工作的必要條件,應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。

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